二氧化碳培養箱無(wú)污染控制技術(shù)
點(diǎn)擊次數：1182 更新時(shí)間：2022-12-01
二氧化碳培養箱是通過(guò)在培養箱箱體內模擬形成一個(gè)類(lèi)似細胞/組織在生物體內的生長(cháng)環(huán)境如穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值：7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%)，來(lái)對細胞/組織進(jìn)行體外培養的一種裝置。 廣泛應用于細胞、組織培養和某些特殊微生物的培養，常見(jiàn)于細胞動(dòng)力學(xué)研究、哺乳動(dòng)物細胞分泌物的收集、各種物理、化學(xué)因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產(chǎn)、培養雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領(lǐng)域。
在生物活體內，生物體有自身的免疫系統保護細胞或組織，但是在體外培養時(shí)，沒(méi)有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養箱的基本參數溫度、CO2 和濕度，大多數培養箱都能滿(mǎn)足研究實(shí)驗的需要。然而，針對培養過(guò)程中面臨的各種污染源，各品牌二氧培養箱的控制方式和效果不盡相同，因此細胞體外培養中*的威脅實(shí)際上是污染問(wèn)題。
二氧化碳培養箱中的主要污染源：細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。
對于細胞來(lái)說(shuō)，理想的培養環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存，培養箱本身是不會(huì )辨別的，而細胞培養中大部分時(shí)間里細胞都是位于培養箱內，因此箱體內能否抑菌或滅菌關(guān)鍵！
細菌：細菌污染后，培養基1-2天就會(huì )變色，對細胞生長(cháng)影響明顯，應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺。
病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離，丟棄處理，相對來(lái)說(shuō)容易處理，對操作者威脅較大；盡管病毒污染的細胞不影響原代培養，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了；目前沒(méi)有好的抑制方法，包括現在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。
支原體：支原體污染后，因為它們不會(huì )使細胞死亡可以與細胞長(cháng)期共存，培養基一般不發(fā)生渾濁，細胞無(wú)明顯變化，外觀(guān)上給人以正常感覺(jué)，實(shí)則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長(cháng)等，往往被大多數實(shí)驗者忽視。
非同種細胞：即細胞交叉污染，由于細胞培養操作時(shí)各細胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴格分開(kāi)，往往會(huì )使一種細胞被另一種細胞污染。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實(shí)驗宣告無(wú)效。
因此，以上污染一旦發(fā)生，細胞*后基本只能丟棄，實(shí)驗無(wú)法挽救，對于許多取樣困難的實(shí)驗損失無(wú)法估量！
目前，二氧化碳培養箱的滅菌技術(shù)主要有干熱、濕熱、紫外燈照射、消毒劑擦拭等。
高溫干熱空氣滅菌是目前有效的滅菌技術(shù)，能消滅所有微生物污染源(包括耐高溫的芽孢桿菌)；濕熱滅菌通常用于高壓蒸汽滅菌中，比較少用在CO2培養箱上，濕熱滅菌在常壓下又叫煮沸法，煮沸的水溫一般至少需為100℃，細菌繁殖體煮沸5分鐘被殺死，但芽胞常需煮沸2小時(shí)以上才可被殺死；紫外燈照射法的有效性受很多因素影響，如遮擋、時(shí)間、強度、照射距離，濕度等，滅菌效果很難保證；消毒劑擦拭法是對表面滅菌的方法，適合于平整的表面如實(shí)驗臺面，而箱體內部設計的死角、各種器件因無(wú)法擦拭等因素導致滅菌效果也很有限，而且含氯、碘的消毒劑對于不銹鋼有腐蝕作用，不能對不銹鋼箱體進(jìn)行擦拭滅菌。
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